세포 냉동 보존에 디메틸 설폭사이드 적용

디메틸설폭사이드는 중요한 삼투성 세포 보호제입니다. 심부온도(영하 200도)에서 세포를 동결보존하는 과정에서 세포내 액체얼음결정의 형성, 삼투압 변화, 세포구조 장애로 인한 손상을 예방하기 위해서는 DMSO가 함유된 동결보호제의 사용이 필요하다.
DMSO는 세포막을 세포 내부로 빠르게 침투하여 어는점을 낮추고, 어는 과정을 지연시키며, 세포내 이온 농도를 높이고, 세포내 얼음 결정의 형성을 감소시켜 세포 손상을 줄일 수 있습니다.
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디메틸술폭시드의 세포독성은 매우 낮은 온도에서 억제되며 소생 시 작용이 빨라서 가능한 한 빨리 디메틸술폭시드를 씻어내야 합니다. 그렇지 않으면 세포에 심각한 독성을 유발할 수 있습니다.
디메틸설폭사이드(DMSO)는 냉동보존된 세포에 대한 최고의 보호제이지만 세포독성이 높은 화학적 시험제이기도 합니다. 결과는 배양 배지 내 DMSO의 농도가 10%일 때 세포 성장 억제율이 거의 100%임을 보여줍니다. 1‰ 농도에서는 억제율이 35%였으며, 0.04‰ 농도에서도 DMSO는 세포 성장에 부정적인 영향을 미쳤다.

실험에서는 어떻게 사용하나요? 다음에 말씀드릴게요
01 세포 냉동보존
① 10%DMSO 또는 글리세린과 10~20% 송아지혈청을 함유한 동결배양액을 제조하였다.
② 대수증식기의 세포를 채취하여 기존 배양액을 제거하고 PBS로 세척합니다.
③ PBS를 제거하고 적당량의 트립신을 첨가하여(페트리 접시 표면을 덮음) 단일층의 성장하는 세포를 소화시켰다.
④ 1000rpm으로 5분간 원심분리한다.
⑤ 트립신을 제거하고 준비된 냉동배양액 적당량을 첨가한 후 빨대로 가볍게 불어 세포를 균일하게 한 후 계수하고 최종 냉동액의 세포밀도를 5×106/ml ~ 1×107/ml로 조정한다.
(6) 세포를 냉동보관용 튜브로 나누어 각 튜브마다 1~1.5ml씩 담았다.
⑦ 냉동보관용기에 세포명, 냉동시간, 작업자를 기재합니다.
냉동: 표준 냉동 절차는 -1 ~ -2℃/min의 냉각 속도입니다. 온도가 -25℃ 미만에 도달하면 -5℃ ~ -10℃/min까지 증가할 수 있습니다. -100°C에서는 액체질소에 빠르게 담글 수 있습니다. 또는 세포가 들어 있는 냉동보관 튜브를 -20℃ 냉장고에 2시간 동안 넣은 후 -70℃ 냉장고에 밤새 보관한 후 냉동보관 튜브를 꺼내 액체질소 용기에 넣을 수도 있습니다.
02 세포회복
① 액체질소 용기에서 냉동보관관을 꺼내어 37℃ 미지근한 물에 직접 담근 후 수시로 흔들어 녹여주세요.
② 37℃ 수조에서 냉동보존튜브를 꺼내어 뚜껑을 열고 세포현탁액을 빨대로 흡입한 후 원심분리튜브에 넣고 배양액을 10배 이상 첨가하여 잘 섞는다.
③ 원심분리기, 1000rpm, 5분
④ 상층액을 버리고 10% 송아지혈청이 함유된 배양배지를 재현탁세포에 첨가하여 계수하고 세포밀도를 조절한 후 배양병에 접종하여 37℃에서 배양한다.
⑤ 다음날 배양액을 교체하고 계속 배양한다.
그럼 그게 DMSO죠
세포 냉동보존에 사용하는 방법
DMSO 및 기타 화학 원료, 시약 판매 가능